The method makes it possible to detect and identify spiramycin, tylosin and virginiamycin in animal feeding stuffs (feed raw materials of mainly plant origin and compound feeds) excluding mineral feeds and premixtures. The limit of detection is about 2 mg/kg for spiramycin, 1 mg/kg for tylosin and 1 mg/kg for virginiamycin. In some milk replacers, it can be slightly higher than 1 mg/kg for virginiamycin.
Reported limits of detection are probably little overestimated but were fully validated during the collaborative study. In each laboratory, each day of analysis, spiked blank samples at 1 mg/kg for spiramycin and virginiamycin and at 0,5 mg/kg for tylosin are analysed for checking lower detection limits. These lower limits of detection are achievable, but should be established with an in-house validation first.
Some other antibiotics can interfere in the detection of these 3 specific macrolide antibiotics. The known interferences are specified in Annex A of the method.
That method should be used as a qualitative screening and/or a post-screening method (after microbiological plate test, for example). The follow-up of the antibiotics presence may be done by other analytical technics (LC and/or LC-MS technics). For confirmatory purposes, LCMS is required.
Das Verfahren ermöglicht es, Spiramycin, Tylosin und Virginiamycin in Futtermitteln (Futtermittel-Ausgangserzeugnisse hauptsächlich pflanzlichen Ursprungs und Mischfuttermittel) nachzuweisen und zu identifizieren, davon ausgeschlossen sind Mineralfuttermittel und Vormischungen. Die Nachweisgrenze (en: limit of detection, LOD) beträgt 2 mg/kg bei Spiramycin, 1 mg/kg bei Tylosin und 1 mg/kg bei Virginiamycin. In einigen Milchaustausch-Futtermitteln kann die Nachweisgrenze bei Virginiamycin leicht über 1 mg/kg liegen.
Die berichteten Nachweisgrenzen werden wahrscheinlich ein wenig überschätzt, sie wurden aber während des Ringversuchs vollständig validiert. In jedem Laboratorium, an jedem Tag der Untersuchung werden aufgestockte Blindwertproben mit 1 mg/kg bei Spiramycin und Virginiamycin sowie mit 0,5 mg/kg bei Tylosin zur Prüfung der unteren Nachweisgrenzen untersucht. Diese unteren Nachweisgrenzen sind erreichbar, sie sollten jedoch zuerst mit einer internen Validierung bestimmt werden.
Einige andere Antibiotika können den Nachweis dieser 3 spezifischen Makrolid-Antibiotika stören. Die bekannten Störungen (Interferenzen) sind in Anhang A des Verfahrens angegeben.
Das Verfahren sollte als ein qualitatives Screeningverfahren und/oder Post-Screeningverfahren (beispielsweise nach dem mikrobiologischen Plattentest) angewendet werden. Die Nachuntersuchung hinsichtlich des Vorhandenseins der Antibiotika darf durch andere Untersuchungstechniken (LC- und/oder LC-MS-Ver-fahren) erfolgen. Für Bestätigungszwecke ist die Flüssigchromatographie mit Massenspektrometrie (en: liquid chromatography/mass spectrometry, LC-MS) erforderlich.