This Technical Specification specifies an enzyme linked immunsorbent assay (ELISA) method for the determination of hazelnut from food samples. In the ELISA the antibodies bind to hazelnut proteins from the food sample. The result of the ELISA is given in mg hazelnut/kg (ppm) because the calibrators consist of an extract of whole hazelnut.
Matrices like cereals, ice cream, cookies, chocolate, sausage, cottage cheese, yogurt and salad dressing were validated by spiking experiments with a carboxymethylcellulose-suspension containing hazelnut paste.
The monoclonal antibodies, raised against the whole aqueous extract of hazelnut, detect proteins with approximate molecular weights of 14 kDa, 18 kDa, and 42 kDa. The antibodies detect the major thermostable allergen Cor a9 (11S storage protein). Both antibodies were evaluated by western blots with partially purified hazelnut extracts and purified allergenic proteins.
The ELISA test method is commercially available. The performance has been validated by an in house validation performed by the manufacturer. All parameters of interest are indicated.
In addition, the ELISA was successfully validated by a collaborative study in order to determine the interlaboratory reproducibility. This ring trial was organised by the working group established by the Federal Office of Consumer Protection and Food Safety (BVL) for the execution of § 64 of the German Food and Feed Code (LFGB) for the determination of hazelnut content in dark chocolate. Fourteen German laboratories participated in this collaborative study.
Diese Technische Spezifikation legt ein ELISA-Verfahren (enzymgebundenes Immunosorbent-Verfahren, en: enzyme linked immunosorbent assay) für den Nachweis von Haselnuss aus Lebensmittelproben fest. Im ELISA-Verfahren binden die Antikörper an die Haselnussproteine aus den Lebensmittelproben. Das Ergebnis aus dem ELISA-Verfahren wird in mg Haselnuss/kg (ppm) angegeben, da die Kalibratoren aus einem Extrakt der ganzen Haselnuss bestehen.
Matrices wie Zerealien, Eiscreme, Kekse, Schokolade, Würstchen, Hüttenkäse, Joghurt und Salatdressing wurden durch Aufstockversuche mit einer Haselnusspaste enthaltenden Carboxymethylcellulose-Suspension validiert.
Die monoklonalen Antikörper, die gegen den gesamten wässrigen Haselnussextrakt gerichtet sind, weisen sowohl Proteine mit ungefähren Molekulargewichten von 14 kDa, 18 kDa und 42 kDa als auch das thermostabile Major-Allergen Cor a9 (11S-Speicherprotein) nach. Beide Antikörper wurden durch den Western Blot, mit teilweise gereinigten Haselnussextrakten und gereinigten allergenen Proteinen, bewertet.
Das ELISA-Prüfverfahren ist kommerziell erhältlich. Die Leistungsfähigkeit wurde in einer vom Hersteller durchgeführten betriebsinternen Validierung bestätigt. Alle interessierenden Parameter sind angegeben.
Zusätzlich wurde das ELISA-Verfahren durch einen Ringversuch erfolgreich validiert, um die Vergleich-präzision zwischen den Laboratorien zu bestimmen. Dieser Ringversuch, an dem 14 deutsche Laboratorien beteiligt waren, wurde durch die beim Bundesamt für Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit (BVL) bestehende Arbeitsgruppe zur Durchführung von § 64 des Lebensmittel-, Bedarfsgegenstände- und Futter-mittelgesetzbuches (LFGB) für die Bestimmung des Haselnussgehalts in feinherber Schokolade organisiert.