This Technical Specification describes a procedure through which pollen – in particular pollen of genetically modified organisms (GMO) – can be sampled by means of bee colonies.
Bee colonies, especially the foraging bees, actively roam an area and are therefore area related samplers. Pollen sampling depends on the collection activity of the bees and the availability of pollen sources within the spatial zone according to the bees' preferences (supply of melliferous plants). A colony of bees normally forages over an area of up to 5 km radius (median 1,6 km, mean 2,2 km), in rare cases some bees may also forage in greater distances up to 10 km and more.
Foragers fix the gathered pollen on the outside of their hind legs (pollen loads, also known as pollen pellets). Inside the hive they place these pollen loads into comb cells close to the brood nest (bee bread). Furthermore, foragers gather nectar and honeydew. Nectar contains pollen which fell from the anthers of the blossom into the nectar drop, or pollen which was dispersed by the wind and sticks in the nectar of other blossoms or adheres to the sticky honeydew of plants. Nectar and honeydew are converted to honey and stored by the bees in the beehive.
Honey, pollen load and bee-bread may be used as sample matrices for the subsequent analysis of pollen as it is possible to concentrate sufficient amounts of pollen for microscopic and molecular biological diagnostics.
Microscopic analysis is used to identify the various pollen types and to quantify the exposure to the target pollen types in question. GMO exposure is analysed by molecular-biological methods: For analysis of pollen DNA quantitative PCR methods are used and described here in this Technical Specification. The analysis of GMO specific proteins and toxins in pollen is possible, too, using ELISA, but to this date the method has not been evaluated enough in pollen matrices for standardization in this Technical Specification.
Diese Technische Spezifikation beschreibt ein Verfahren, mit dem Pollen - insbesondere Pollen von gentechnisch veränderten Organismen (GVO) - mittels Bienenvölkern gesammelt werden können.
Bienenvölker, insbesondere die sammelnden Flugbienen, durchstreifen aktiv ein Gebiet und sind daher flächenbezogene Sammler. Die Pollensammlung steht in Abhängigkeit von der Sammelaktivität der Bienen sowie der Verfügbarkeit von Pollenquellen nach den Vorlieben der Bienen innerhalb des räumlichen Gebiets (Trachtangebot). Ein Bienenvolk befliegt in der Regel ein Gebiet mit einem Radius von bis zu 5 km (Medianwert 1,6 km, Mittelwert 2,2 km), in seltenen Fällen können einige Bienen auch Gebiete in größeren Entfernungen von bis zu 10 km und mehr anfliegen.
Sammelbienen befestigen die gesammelten Pollen auf der Außenseite ihrer Hinterbeine (Pollenladung, auch als Pollenhöschen bezeichnet). Im Inneren des Bienenstocks werden diese Pollenladungen in Wabenzellen in der Nähe des Brutnestes verbracht (Bienenbrot). Außerdem tragen Sammelbienen Nektar und Honigtau ein. Der Nektar enthält Pollen, der aus den Antheren der Blüte in den Nektartropfen gefallen ist, oder Pollen, der durch den Wind verbreitet im Nektar anderer Blüten bzw. auf klebrigem Honigtau an Pflanzen haften bleibt. Im Bienenstock werden Nektar und Honigtau zu Honig konvertiert und gelagert.
Honig, Pollenladung und Bienenbrot können als Probenmatrices für die anschließende Pollenanalyse genutzt werden, da es möglich ist, ausreichende Pollenmengen für eine molekularbiologische Diagnostik zu konzentrieren.
Die mikroskopische Analyse dient der Identifizierung der verschiedenen Pollenarten sowie zur quantitativen Bestimmung der Exposition gegenüber den betrachteten Zielpollenarten. Die GVO-Exposition wird durch molekularbiologische Verfahren ermittelt: Zur Analyse der Pollen-DNA werden quantitative PCR-Verfahren eingesetzt, die in der vorliegenden Technischen Spezifikation beschrieben werden. Durch Verwendung von ELISA können auch in Pollen befindliche GVO-spezifische Proteine und Toxine analysiert werden, jedoch wurde dieses Verfahren bis zum heutigen Datum noch nicht ausreichend für den Einsatz in Pollenmatrices und somit für eine Standardisierbarkeit im Rahmen dieser Technischen Spezifikation validiert.